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Citometria de fluxo

Última atualização em 20 de agosto de 2022

Definição

A citometria de fluxo é um processo usado para analisar as características celulares. O uso de um laser e proteínas marcadas com fluorescentemente, parâmetros como tamanho celular, saúde e fenótipo podem ser determinados. A citometria de fluxo é tão refinada que proteínas individuais podem ser rastreadas. Assim, podemos analisar as redes internas de funcionamento e sinalização de uma célula.

Citometria de fluxo explicada

A citometria de fluxo pode usar a luz do laser ou a impedância elétrica (uma medida eletrônica da oposição de corrente em um circuito CA), ela é executada no mesmo princípio. As células são suspensas em um fluxo de fluido e, uma de cada vez, são passadas através de um foco de luz emocionante.

Como as proteínas ou componentes celulares de interesse foram rotulados fluorescentemente com anticorpos, a luz emissora se espalhará em comprimentos de onda distintos que são lidos por um aparelho de detecção eletrônica. Em seguida, traduz a luz dispersa para as características físicas e químicas quantificáveis das partículas no fluido. Essa habilidade ganha a citometria de fluxo seu lugar como uma ferramenta biomédica essencial para analisar células e seus componentes.

Protocolo de citometria de fluxo

Embora os laboratórios em todo o mundo continuem a otimizar o protocolo de citometria de fluxo, ele inclui convencionalmente as seguintes etapas:

A coloração de anticorpos também pode variar:

  • Com a coloração direta, as células são incubadas com um anticorpo diretamente conjugado a um fluorocromo (por exemplo, FITC). Esta é uma incubação de uma etapa e é particularmente útil para coloração intracelular.
  • Na coloração indireta, o anticorpo primário não é rotulado, mas é detectado por um anticorpo secundário marcado com fluorocromo. Este método significa que anticorpos primários não conjugados podem ser levantados contra muitos alvos diferentes, o que amplia a escolha das proteínas -alvo para o pesquisador.
  • Coloração intracelular refere -se a uma mancha de antígenos intracelulares.
  • Finalmente, as proteínas secretadas por uma célula podem ser marcadas e rastreadas com um bloco de Golgi, seguido de coloração intracelular.

Teste de citometria de fluxo

A citometria de fluxo tem uma grande variedade de usos. Em sua aplicação mais simples, ele pode contar as células à medida que cada uma cruza o feixe do laser. A citometria de fluxo também pode classificar as células das misturas heterogêneas, correlacionando os sinais de luz que eles emitem com a morfologia celular conhecida e os padrões de expressão gênica.

Pode -se dizer muito sobre as próprias partículas emitidas. A citometria de fluxo pode revelar o tamanho, a granularidade e a intensidade fluorescente de uma partícula. Também é útil na detecção de biomarcadores que são importantes para entender a doença. De fato, podemos usar mais de um marcador específico do tipo célula combinado com epítopos fosforilados para fornecer uma maneira única de entender os biomarcadores de sinalização em misturas celulares.

As aplicações mais básicas da citometria de fluxo incluem estudos em:

  • Rastreamento celular
  • Ciclo celular e apoptose (“morte celular”)
  • Fenotipagem
  • Transdução de sinal

A decodificação dos padrões de sinalização também carrega grande significado terapêutico. Os padrões normais podem revelar como os medicamentos funcionam e a descoberta de interrupções na sinalização normal pode nos emprestar informações sobre como uma doença se desenvolve. Isso oferece citometria de fluxo, talvez seu papel mais importante nos testes de diagnóstico.

Análise de citometria de fluxo

A citometria de fluxo tornou -se um padrão de ouro na patologia. Foi usado em áreas tão diversas quanto a ciência marinha e a biologia vegetal, mas ganhou mais popularidade por suas aplicações clínicas em oncologia, distúrbios da imunodeficiência e diagnóstico pré -natal.

A citometria de fluxo é extremamente importante na pesquisa moderna do câncer. Ao manchar para antígenos de superfície específicos, a citometria de fluxo nos permite discernir entre diferentes tipos de células cancerígenas no linfonodo, medula óssea e amostras de sangue coletadas de um paciente. Por exemplo, o linfoma geralmente pode ser diagnosticado usando citometria de fluxo. Da mesma forma, essa ferramenta pode avaliar o risco de recorrência dos cânceres da bexiga, mama e próstata, medindo a quantidade de DNA reativo à luz encontrado nas células cancerígenas. Esta é claramente uma ferramenta crucial para milhões de sobreviventes de câncer que estão em remissão a cada ano.

Suas aplicações no diagnóstico de doenças da imunodeficiência primária (PI) são igualmente potentes. As doenças PI são um grupo de distúrbios crônicos raros que comprometem o sistema imunológico do paciente afetado de combater infecções. Essas infecções são recorrentes e podem afetar a pele, os pulmões, a garganta, o cérebro ou até os tratos gastrointestinais e urinários. Embora o diagnóstico de distúrbios do PI requer vários testes, a citometria de fluxo é uma parte essencial do trabalho inicial e do gerenciamento subsequente.

Em suma, as diversas aplicações de citometria de fluxo tornam seu uso muito promissor, e prevê -se que apareça em destaque nas visitas de rotina e hospitalar nos próximos anos.

Questionário

1. Defina o principal objetivo da citometria de fluxo:

2. Qual “tag”/conduíte a citometria de fluxo usa para identificar seus alvos?

3. Quais 2 fontes de energia a citometria de fluxo usa, conforme mencionado no artigo?

4. Em qual das seguintes situações a citometria de fluxo seria uma ferramenta útil para análise?

5. Um cientista usa citometria de fluxo para determinar quantos tipos de células estão presentes em uma amostra. No gráfico que ela recebe do computador, existem três grupos distintos. Quantos tipos de células estão presentes na amostra?

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